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Histochemical detection重組質體的檢定

更新時間:2013-02-19點擊次數:1394

儀器用具:
平端鑷子

藥品試劑:
Nitrocellulose 濾膜
LB/Amp/IPTG/X-Gluc plate (LB plate 添加100 μg/mL ampicillin, 0.2 M IPTG,
50 μg/mL X-Gluc)

方法步驟:
1) 前一天進行轉形的培養皿,當菌落長至約0.5 mm 大小時,將培養皿移至4℃放置至少1 h。
2) 準備一張無菌的硝化纖維濾膜,以鉛筆在邊緣標上組別。
◆ 請戴手套后再拿取濾膜!
3) 打開培養皿蓋子,以兩支扁平鑷子將濾膜兩邊夾住,輕輕覆蓋在菌落上方,盡可能避免有氣泡產生。
◆ 注意!濾膜覆蓋上去后就不要再移動!
4) 等濾膜*濕透后,以針頭在濾膜邊緣戳洞做記號 (至少做三個記號)。 小心把濾膜掀起,菌落朝上放置在LB/Amp/IPTG/X-Gluc plate 上。蓋上蓋子,在37℃培養,若轉形株帶有接上gus 的質體,菌落應在1~2 h 內轉呈藍色。原培養皿則置回37℃使菌落再長出。
5) 將濾膜與原培養皿對照,標出有藍色菌落位置。 選取數個菌落,以劃單一菌落的方式分別接種在LB/Amp/plate 上,置37℃直至菌落長出。 亦同時接種于3 mL LB/Amp 培養液,于37℃震蕩培養過夜,以抽取質體,進行限制酶分析。

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